Фосфорилирането активира главния регулатор на растежаella в Arabidopsis чрез насърчаване на асоциацията на хистон H2A с хроматин.

ДЕЛЛА протеините са консервирани майсторскирегулатори на растежакоито играят централна роля в контролирането на развитието на растенията в отговор на вътрешни и екологични сигнали. действа като транскрипционен регулатор и се насочва към целеви промотори чрез свързване с транскрипционни фактори (TF) и хистон H2A чрез своя GRAS домейн. Последните проучвания показват, че стабилността на * * ...ga1-3(RGA, AtDELLA), пречистени от Arabidopsis thaliana чрез масспектрометричен анализ, показват, че фосфорилирането на два RGA пептида в PolyS и PolyS/T регионите насърчава свързването с H2A и засилва RGA активността. Асоциация на RGA с целеви промотори. Важно е да се отбележи, че фосфорилирането не влияе върху RGA-TF взаимодействията или RGA стабилността. Нашето проучване разкрива молекулярния механизъм, чрез който фосфорилирането индуцира PE активност.
За да се изясни ролята на фосфорилирането в регулирането на функцията на PE, е от решаващо значение да се идентифицират местата за фосфорилиране на PE in vivo и да се извършат функционални анализи в растенията. Чрез афинитетно пречистване на растителни екстракти, последвано от MS/MS анализ, идентифицирахме няколко фосфозита в RGA. При условия на дефицит на GA, фосфорилирането на RHA се увеличава, но фосфорилирането не влияе върху неговата стабилност. Важно е, че co-IP и ChIP-qPCR анализите разкриха, че фосфорилирането в PolyS/T областта на RGA насърчава взаимодействието му с H2A и свързването му с целевите промотори, разкривайки механизма, чрез който фосфорилирането индуцира функцията на RGA.
RGA се привлича към целевия хроматин чрез взаимодействието на LHR1 поддомейна с TF и ​​след това се свързва с H2A чрез неговия PolyS/T регион и PFYRE поддомейн, образувайки H2A-RGA-TF комплекса за стабилизиране на RGA. Фосфорилирането на Pep 2 в PolyS/T региона между PELA домейна и GRAS домейна от неидентифицирана киназа усилва свързването с RGA-H2A. Мутантният протеин rgam2A премахва фосфорилирането на RGA и приема различна протеинова конформация, за да попречи на свързването с H2A. Това води до дестабилизиране на преходните TF-rgam2A взаимодействия и дисоциация на rgam2A от целевия хроматин. Тази фигура изобразява само RGA-медиирана транскрипционна репресия. Подобен модел може да бъде описан за RGA-медиирана транскрипционна активация, с изключение на това, че H2A-RGA-TF комплексът би насърчил транскрипцията на целевия ген, а дефосфорилирането на rgam2A би намалило транскрипцията. Фигурата е модифицирана от Huang et al.21.
Всички количествени данни бяха статистически анализирани с помощта на Excel, а значимите разлики бяха определени с помощта на t-тест на Стюдънт. Не бяха използвани статистически методи за предварително определяне на размера на извадката. Не бяха изключени данни от анализа; експериментът не беше рандомизиран; изследователите не бяха слепи за разпределението на данните по време на експеримента и оценката на резултатите. Размерът на извадката е посочен в легендата на фигурата и файла с изходни данни.
За повече информация относно дизайна на изследването вижте резюмето на доклада за естественото портфолио, свързано с тази статия.
Данните от протеомиката, получени чрез масспектрометрия, са предоставени на консорциума ProteomeXchange чрез партньорското хранилище PRIDE66 с идентификатор на набора от данни PXD046004. Всички останали данни, получени по време на това проучване, са представени в Допълнителна информация, Файлове с допълнителни данни и Файлове с сурови данни. За тази статия са предоставени изходни данни.