Растителни и патогенни материали
Популация за картографиране на асоциация на сорго, известна като популация за преобразуване на сорго (SCP), беше предоставена от д-р Пат Браун от Университета на Илинойс (сега в UC Davis).Беше описано по-рано и представлява колекция от различни линии, превърнати в нечувствителност към фотопериод и по-малък ръст, за да се улесни растежа и развитието на растенията в среда на САЩ.510 линии от тази популация бяха използвани в това изследване, въпреки че поради лоша кълняемост и други проблеми с контрола на качеството, не всички линии бяха използвани в анализа на трите признака.В крайна сметка бяха използвани данни от 345 линии за анализ на реакцията на хитин, 472 линии за реакцията flg22 и 456 за резистентност към TLS.B. cookieiщам LSLP18 е получен от д-р Burt Bluhm от университета на Арканзас.
Измерване на отговора на MAMP
Два различни MAMP бяха използвани в това изследване flg22, (Genscript каталог # RP19986) и хитин.Растенията от сорго се отглеждат в вложки, положени върху плоскости, пълни с почва (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) в оранжерията.Растенията бяха напоени в деня преди събирането на пробата, за да се избегне допълнителната влага на листата в деня на събирането.
Линиите бяха рандомизирани и по логистични причини бяха засадени на партиди от 60 линии.За всяка линия бяха засадени три „саксии“ с две семена на линия.Следващите партиди бяха засадени веднага след като предишната партида беше обработена, докато цялата популация беше оценена.Бяха проведени два експериментални цикъла и за двата MAMP с генотипове, повторно рандомизирани във всеки от двата цикъла.
ROS анализите се провеждат, както е описано по-горе.Накратко, за всяка линия бяха засадени шест семена в 3 различни саксии.От получените разсад бяха избрани три въз основа на еднородност.Разсад, който изглеждаше необичайно или беше значително по-висок или по-нисък от повечето, не бяха използвани.Четири листни диска с диаметър 3 mm бяха изрязани от най-широката част на 4-ия лист на три различни 15-дневни растения сорго.Един диск на лист от две растения и два диска от едно растение, като вторият диск става контрол на водата (вижте по-долу).Дисковете бяха поотделно плаващи върху 50 µl Н20 в черна плака с 96 гнезда, запечатани с алуминиево уплътнение, за да се избегне излагане на светлина, и държани при стайна температура за една нощ.На следващата сутрин беше направен реакционен разтвор с помощта на 2 mg/ml хемилуминесцентна сонда L-012 (Wako, каталожен № 120-04891), 2 mg/ml пероксидаза от хрян (Тип VI-A, Sigma-Aldrich, каталожен # P6782) и 100 mg/ml хитин или 2 μM Flg22.50 ul от този реакционен разтвор се добавят към три от четирите ямки.Четвъртата ямка беше фиктивна контрола, към която беше добавен реакционният разтвор, с изключение на MAMP.Във всяка плака бяха включени и четири празни ямки, съдържащи само вода.
След добавяне на реакционния разтвор, луминесценцията се измерва с помощта на четец на микроплаки SynergyTM 2 с много откриване (BioTek) на всеки 2 минути за 1 час.Четецът на плаки прави измервания на луминесценцията на всеки 2 минути през този 1 час.Сумата от всичките 31 показания беше изчислена, за да се даде стойността за всяка ямка.Прогнозната стойност за отговора на MAMP за всеки генотип беше изчислена като (средна стойност на луминесценция на трите експериментални ямки — стойността на фалшивата ямка) минус средната стойност на празната ямка.Стойностите на празните ямки бяха постоянно близки до нула.
Листни дискове наNicotiana benthamiana, една високочувствителна линия сорго (SC0003) и една слабо реагираща линия сорго (PI 6069) също бяха включени като контроли във всяка 96-ямкова плака за целите на контрола на качеството.
B. cookieiподготовка на инокулум и инокулация
B. cookieiинокулумът се приготвя, както е описано по-горе.Накратко, зърната от сорго се накисват във вода в продължение на три дни, изплакват се, загребват се в 1L конични колби и се автоклавират за един час при 15psi и 121 °C.След това зърната се инокулират с около 5 ml мацериран мицел от прясна култура отB. cookieiLSLP18 се изолира и се оставя за 2 седмици при стайна температура, като колбите се разклащат на всеки 3 дни.След 2 седмици, заразените с гъбички зърна от сорго се изсушават на въздух и след това се съхраняват при 4 °C до полевата инокулация.Същият инокулум беше използван за целия опит и се правеше нов всяка година.За инокулация, 6-10 заразени зърна бяха поставени в завивката на растения сорго на възраст 4-5 седмици.Спорите, произведени от тези гъби, инициират инфекция в младите растения сорго в рамките на една седмица.
Подготовка на семена
Преди засаждане на полето семената от сорго бяха третирани с фунгицид, инсектицид и смес от антидоти, съдържаща ~ 1% фунгицид Spirato 480 FS, 4% фунгицид Sebring 480 FS, 3% антидот за семена Sorpro 940 ES.След това семената се сушат на въздух в продължение на 3 дни, което осигурява тънко покритие от тази смес около семената.Антидотът позволява използването на хербицида Dual Magnum като третиране преди поникване.
Оценка на устойчивостта на целеви листни петна
SCP беше засаден в Централната изследователска станция за култури в Клейтън, Северна Каролина на 14-15 юни 2017 г. и 20 юни 2018 г. в рандомизиран пълен блоков дизайн с две експериментални повторения във всеки случай.Експериментите бяха засадени на 1,8 m единични редове с 0,9 m ширина на реда, като се използваха 10 семена на парцел.Два гранични реда бяха засадени около периферията на всеки експеримент, за да се предотвратят ръбови ефекти.Експериментите бяха инокулирани на 20 юли 2017 г. и 20 юли 2018 г., когато растенията от сорго бяха в етап на растеж 3. Оценките бяха взети по скали от едно до девет, където растенията, които не показват признаци на заболяване, бяха оценени като девет и напълно мъртвите растения бяха оценени като едно.Бяха направени две оценки през 2017 г. и четири отчитания през 2018 г., започвайки две седмици след инокулацията всяка година.sAUDPC (стандартизирана площ под крива на прогресия на заболяването) се изчислява, както е описано по-горе.
Време на публикуване: 01 април 2021 г